1.菌株管理及相關概念

標準菌株：即0代菌種，是指從官方菌種保藏機構獲得并至少定義到屬或種的水平的菌株。實驗室的標準菌株應有明確來源。

標準儲備菌株：從國內或國外菌種保藏機構獲得的標準菌株經過復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標準貯備菌株。

儲存菌株：儲存菌株通常從凍干或超低溫保存的標準儲存菌株進行制備。

工作菌株：標準儲備菌株或儲存菌株經繼代培養(yǎng)后得到的菌株。工作菌株不可替代標準菌株。

標準培養(yǎng)物：標準菌株、標準儲備菌株、工作菌株的統(tǒng)稱。

商業(yè)派生菌株：即用型與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業(yè)衍生物。常見的有定量工作菌株。

2.標準菌株的獲取

藥品微生物檢驗用的試驗菌應為有明確來源的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株。

標準菌株應來自認可的國內或國外菌種保藏機構。中國藥典2020版以及國標中涉及的菌株主要來自于兩大菌種保藏中心：中國醫(yī)學細菌保藏管理中心（CMCC）、美國標準菌種保藏中心（ATCC）。

菌株購買前需根據實驗室檢測需求制定采購計劃，經審批后，向認可的國內或國外的菌種保藏機構購買標準菌株。標準菌株到達實驗室后，菌種管理人應檢查其名稱、數量以及每一支的完整性，同時將菌種的所有信息填寫記錄（包括菌種名稱、編號、數量、代數、來源、接收日期、接收人等），并將其貯存在規(guī)定溫度的冰箱里。

3.標準菌株的復蘇、復壯和保存

標準菌株的復蘇、復壯或培養(yǎng)物的制備應按供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。復蘇、復壯應選擇營養(yǎng)成分豐富且全面的培養(yǎng)基（例如：TSA/TSB/NA/NB/SDB/SDA等），一般不使用選擇性較強的培養(yǎng)基；特殊的一些菌株在普通的培養(yǎng)基上生長不好，可能還需添加生長因子。

標準儲備菌株應進行純度和特性確認。純度確認包括：平板劃線查看菌落形態(tài)、革蘭氏染色、顯微鏡觀察菌體形態(tài)等；關鍵特性確認可選擇：特征生化反應確認、試劑盒鑒定、菌種鑒定儀鑒定等。需要注意的是，從開啟、復蘇、復壯到純度和特性的確認，都應做好實驗記錄。

標準儲備菌株保存時，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，藥典建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。菌種應設專人管理，菌種保藏的地點應采取一定的措施使非管理者不能輕易獲取，例如加鎖保管，雙人保管等。

標準儲備菌株可用于制備每月或每周1次轉種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。

從保藏機構獲取的凍干菌種為0代菌種，每轉接一次增加一代（1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何形式的轉種均被認為傳代一次），工作菌株的傳代次數應嚴格控制，不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌株變異的風險。

4.工作菌株的制備

工作菌株由儲存菌株或標準貯備菌株制備，除此之外，還可以使用可以溯源的商業(yè)派生菌株。標準菌株如果經過確認試驗證明已經老化、退化、變異、污染等或該菌株已無使用需要時，應及時滅菌銷毀。

5.實驗室菌株管理

菌種必須定期轉種傳代，并做純度、特性等實驗室所需關鍵指標的確認，實驗室應建立菌種管理（從標準菌株到工作菌株）的文件和記錄，內容包括菌株的申購、進出、收集、貯藏、確認、轉種、使用以及銷毀等全過程。每支菌種都應注明其名稱、標準號、接種日期、傳代數，并記錄菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、菌種保藏的位置和條件等信息。

有關微生物實驗室菌株管理及使用涉及的相關法規(guī)如下，可供參考：

中國藥典2020版《9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則》

中國藥典2020版《9204微生物鑒定指導原則》

中國藥典2020版《9205藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)控和控制指導原則》

藥品生產質量管理規(guī)范（2010年修訂）

CNAS-CL03-A001-2019《能力驗證提供者認可準則在微生物領域的應用說明》

CNAS-CL05-2009《實驗室生物安全認可準則》

GB 4789.28-2013食品安全國家標準 食品微生物學檢驗培養(yǎng)基和試劑的質量要求

GB/T 27405-2008 《實驗室質量控制規(guī)范食品微生物檢測》

GB 4789.1-2016 食品安全國家標準食品微生物學檢驗 總則

SN/T 1538.1-2016 培養(yǎng)基制備指南 第1部分 實驗室培養(yǎng)基制備質量保證通則

SN/T 1538.2-2016 培養(yǎng)基制備指南 第2部分 培養(yǎng)基性能測試實用指南

SN/T 2660-2010 食品微生物實驗室菌種保藏方法

6.商業(yè)派生菌株

商業(yè)派生菌株是標準菌株的商業(yè)衍生物，最常見的是定量工作菌株。在中國藥典2015版9203指導原則里面有提到“藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內或國外菌種保藏機構的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株”，USP<1117>也有關于可以使用合格的商品化菌株的描述“Cultures for use in compendial tests should be acquired from a national culture collection or a qualified secondary supplier”。隨著技術的進步與發(fā)展，微生物實驗室穩(wěn)定、高效的需求，用于質控的商業(yè)化定量工作菌株的廣泛應用定是必然趨勢。（現以最新標準為準）

商業(yè)派生菌株要求相關特性與標準菌株等效，除此之外，還有關鍵一點就是“可以溯源”。微生物"溯源"通常包含兩層意思，一是指程序、途徑合法有序，來源和去向清晰可控；另外是技術層面的佐證，比如株水平的鑒定識別等。這兩個層面互為補充支撐，以保證菌種準確無誤、合法有效。

選擇使用商業(yè)派生菌株時，建議做好實驗室檢測結果與標準菌株的差異分析和風險評估。綜合評估之后，選擇合適的商業(yè)派生菌株。