一. 原理

     “化學鍵合相色譜法”——采用化學鍵合相作固定相的液相色譜法。

     化學鍵合相是利用化學反應(yīng)通過共價鍵將有機分子鍵合在載體（硅膠）表面，形成均一、牢固的單分子薄層而構(gòu)成的固定相。其分離機理為吸附和分配兩種機理兼有。對多數(shù)鍵合相來說，以分配機理為主。

      通常，化學鍵合相的載體是硅膠，硅膠表面有硅醇基， ≡Si–OH，它能與合適的有機化合物反應(yīng)，獲得各種不同性能的化學鍵合相。

從鍵合反應(yīng)的性質(zhì)可分為：酯化鍵合（≡Si-O-C）、硅氮鍵合（≡ Si-N）和硅烷化鍵合（≡Si-O-Si-C）等；硅烷化鍵合相應(yīng)用最廣泛。這種鍵合相是用有機氯硅烷與硅醇基發(fā)生反應(yīng)：

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≡Si–OH + C₁₈H₃₇ SiCl₃→ ≡Si-O–Si–C₁₈H₃₇ + HCl

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    這種固定相在 pH = 2～8.5 范圍內(nèi)對水穩(wěn)定，有機分子與載體間的結(jié)合牢固，固定相不易流失穩(wěn)定性好。

    十八烷基硅烷鍵合相（Octadecylsilane 簡稱ODS或C₁₈）： 是最常用的非極性鍵合相。它們用于反相色譜法，在70℃以下和 pH 2～8范圍內(nèi)可正常工作。

化學鍵合固定相具有如下優(yōu)點：

  ①柱效高：傳質(zhì)速度比一般液體固定相快；

  ②穩(wěn)定性：耐溶劑沖洗，耐高溫，無固定液流失，從而提高了色譜柱的穩(wěn)定性和使用壽命；

應(yīng)用范圍廣：改變鍵合有機分子的結(jié)構(gòu)和基團的類型，能靈活地改變分離的選擇性，適用于分離幾乎所有類型的化合物；且能用各種溶劑作流動相（梯度洗脫）。

二. 流動相

   化學鍵合相色譜所用流動相的極性必須與固定相顯著不同，根據(jù)流動相和固定相的相對極性不同分為：

 1. 正相鍵合相色譜法：流動相極性小于固定相極性。

    常用非極性溶劑如烷烴類溶劑，樣品組分的保留值可用加入適當?shù)挠袡C溶劑（調(diào)節(jié)劑）的辦法調(diào)節(jié)洗脫強度。常用有機溶劑為極性溶劑如氯仿、二氯甲烷、已腈、醇類等。

    適用于分離中等極性化合物，如脂溶性維生素、甾族、芳香醇、芳香胺、脂、有機氯農(nóng)藥等。

 2. 反相鍵合相色譜法：流動相極性大于固定相極性。

    流動相多以水或無機鹽緩沖液為主體，再加入一種能與水相混溶的有機溶劑（如甲醇、乙睛、四氫呋喃等）為調(diào)節(jié)，根據(jù)分離需要，改變洗脫劑的組成及含量，以調(diào)節(jié)極性和洗脫能力。在反相鍵合相色譜中，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。

    固定相一般為C_18、 C₈。

反相鍵合相色譜法應(yīng)用最廣泛，因為它以水為底溶劑，在水中可以加入各種添加劑，改變流動相的離子強度、pH 值和極性等，以提高選擇性，而且水的紫外截至波長低，有利痕量組分的檢測，反向鍵合相穩(wěn)定性好，不易被強極性組分污染，且水廉價易得，安全。