稀釋涂布平板法計數微生物的計算公式為每克樣品中的菌株數=（C÷V)×M，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用稀釋液的體積，M代表稀釋倍數。學生對該公式的理解存在多種認知誤區(qū)，導致此類問題得分率低，現結合典型試題進行分析。

公式中的C不一定是所有實驗所得菌落數的平均值。為增強實驗說服力和減小實驗誤差，本實驗應設置對照實驗和重復實驗。此實驗的對照實驗是將未涂布菌液的培養(yǎng)基放置在相同條件下培養(yǎng)，其目的是排除培養(yǎng)基污染對實驗結果產生的影響。若空白對照組平板出現菌落,則說明空白對照組的平板被污染，進而推測實驗組平板也可能被污染，這種情況不能直接將實驗組平板的菌落數取平均值，應重新進行實驗，只有空白培養(yǎng)基沒有出現菌落，實驗結果才可信。此實驗的重復實驗是將同一稀釋度的稀釋液至少涂布3個平板（一般設置3—5個平板）。選擇菌落數在30—300的平板計算平均菌落數。若重復實驗中某個平板的菌落數與其他差別甚遠，如四個平板的菌落數分別為42、200、256、234，菌落數42與其他數值差異過大，說明該平板操作過程有誤，則該菌落數應舍棄。若舍棄后不足三個平板，不能用菌落數相近的兩個平板取平均值，應找到原因并重做實驗。若計算每克樣品中的某種菌株數，則C應代表某一稀釋度下平板上生長的符合該菌菌落特征的菌落數的平均值，培養(yǎng)基上其他菌種形成的菌落數不能一并計算在內。如檢測1L待測水樣中的大腸桿菌數目只統(tǒng)計大腸桿菌菌落數的平均值。

平板中菌落數過少會導致計數誤差過大，菌落數過多又會造成計數困難，為確保有效活菌數的準確測定，應合理設定稀釋倍數。待測樣品中微生物數量越多，所需稀釋倍數越大，而微生物數量越少，所需稀釋倍數越小。如測定土壤中細菌數量，一般選用104、105和106倍稀釋：測定放線菌數量，一般選用103、104和105倍稀釋；測定真菌數量，一般選用102、103和104倍稀釋：測定自來水中大腸桿菌數量，一般不稀釋，直接進行涂布培養(yǎng)。人教版高中生物教材給出的樣品稀釋的流程示范是將10g土樣加入到90mL無菌水中得到稀釋10倍的樣液，從稀釋10倍的樣液中取1mL加入到9mL無菌水中得到稀釋100倍的樣液，依次類推。若取6g土樣配制成稀釋10倍的土壤溶液，則土壤占混合液的10%，土壤溶液總量為60mL，應添加54mL的無菌水。若取1g土樣配制成稀釋100倍的土壤溶液，則土壤占混合液的1%，土壤溶液總量100mL，應添加99mL的無菌水。

微生物計算公式中的V代表涂布平板時所用稀釋液的體積.通常為0.1mL。但若待測樣品中微生物數目較少，接種0.1mL經培養(yǎng)后平板上菌落數達不到30�？稍龃蠼臃N量（如接種1mL）。試題中經常改變涂布平板時所用的稀釋液和所求樣品的體積和質量，要注意做好單位換算，如1cm3=103μL=1 mL=10L。體積和質量的換算公式是體積=質量：密度（V=m/p），水的密度是1g/cm3.則質量頭1 g的水的體積是1 cm3即1 mL。

從稀釋涂布平板計數的原理分析，運用該方法統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的實際數目低。因為樣品一般不易完全分散成單個細胞，當兩個或多個活細胞連在一起時。平板上觀察到的只是一個菌落，從稀釋涂布平板計數的過程分析 稀釋倍數是否合適、涂布是否均勻、培養(yǎng)環(huán)境是否能保證微生物正常生長、計數是否存在漏計或重復計數等情況都會影響統(tǒng)計結果。除此之外，還要考慮培養(yǎng)時間對菌落數目的影響。菌落數目需要每隔一段時間統(tǒng)計一次，選取菌落數目穩(wěn)定時的記錄作為結果，防止因培養(yǎng)時間不足遺漏菌落的數目。