GB 4789.40-2024《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾檢驗》為上述標準之一。標準于2024年2月8日發(fā)布，將于2024年8月8日正式實施。

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本文通過對比克羅諾桿菌檢驗2024版與2016版標準，使讀者更好地了解2024版修訂的變更，以便更好地掌握克羅諾檢驗的發(fā)展方向。

本標準與GB4789.40-2016相比主要變化如下：

--修改了標準名稱，刪除了阪崎腸桿菌，修改為“食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 克羅諾桿菌檢驗”。

--標準適用范圍增加了嬰幼兒輔助食品;

--增加了PCR鑒定方法作為選做內容;

--刪除了挑取黃色菌落和生化鑒定中的產黃色素和苦杏仁苷項目;

--修改了培養(yǎng)基和試劑pH調節(jié)方法;

--修改了預熱、選擇性增菌溫度以及TSA平板的培養(yǎng)溫度和時間;

--修改了生化反應的培養(yǎng)溫度及氨基酸培養(yǎng)基的制備。

5.1 前增菌和選擇性增菌

取檢樣 100g(mL)置于無菌容器中,加入900mL已預熱至 41℃±1℃的 BPW,用手緩緩地搖動至檢樣充分溶解后,36℃±1℃培養(yǎng)18h±2h。輕輕搖動混勻培養(yǎng)過的前增菌液,移取1mL轉入10mLmLST-Vm肉湯中,41.5℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h。

5.2 分離

5.2.1 輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養(yǎng)物,使用10μL接種環(huán)各取1環(huán)增菌培養(yǎng)物,分別劃線接種于2個克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基平板,36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h,或按培養(yǎng)基要求條件培養(yǎng)。

5.2.2 可疑菌落按顯色培養(yǎng)基要求進行判定,每個平板挑取至少 5個可疑菌落(不足5個時挑取全部可疑菌落) ,分別劃線接種于TSA平板,36℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h。

3.增加PCR鑒定方法：隨著微生物檢驗對快速方法的檢測需求， GB標準中引入PCR法，即可節(jié)省檢測時間，減少工作量，又可以提高結果的準確性，實現對可疑菌落高通量的篩選。

5.4 確證試驗

選做5.3時,自PCR結果陽性的TSA平板上挑取菌落進行生化鑒定, PCR結果陰性的TSA平板不再進行生化鑒定。

未選做 5.3時 ,直接將 5.2.2的可疑菌落接種TSA平板后進行生化鑒定。

可以首先鑒定克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基平板上最具特征性的菌落接種的TSA平板上的菌落。如果是陽性,則不需要測試其他TSA平板上的菌落。如果是陰性,則選取其他TSA平板上的菌落進行鑒定,直到全部為陰性或發(fā)現陽性菌落為止。為確保結果的準確性,對TSA平板上的菌落進行鑒定時,應使用新鮮的傳代菌落。克羅諾桿菌的主要生化特征見表3。 

上述鑒定也可選擇商生化特征見表3。上述鑒定也可選擇商品化生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統(tǒng)進行 。

6 結果與報告

根據菌落特征、確證試驗(生化鑒定)和/或PCR鑒定結果,報告 100g(mL)樣品中檢出或未檢出克羅諾桿菌。

7 操作步驟

7.1 樣品的稀釋

取檢樣100g(mL)、10g(mL)、1g(mL)各3份,分別置無菌容器中,分別加入900mL、90mL、9mL已預熱至41℃±1℃的BPW,用手緩緩地搖動至檢樣充分溶解,制成1:10樣品勻液,36 ℃±1℃培養(yǎng)18h±2h。輕輕搖動混勻培養(yǎng)過的前增菌液,分別移入1mL轉入10mLmLST-Vm肉湯,41.5℃±1℃培養(yǎng)24h±2h。

7.2 分離、鑒定

同5.2、5.3和5.4。

8 結果與報告

綜合菌落特征、確證試驗(生化鑒定)或 PCR鑒定結果,根據檢出克羅諾桿菌的陽性管數,查MPN檢索表,報告100g(mL)樣品中克羅諾桿菌的MPN值(見附錄C中表 C.1) 。